丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠认知功能的改善作用及机制研究中有哪些突出的特点,实验的过程是怎样进行推进的?这边关于这方面的问题,小编为大家进行分享一下。
一、脓毒症模型的制备
采用CLP法制作脓毒症大鼠模型,按0.3 ml/100 g腹腔注射10%水合氯醛进行麻醉后固定消毒手术区域,腹中线做一长约1 cm切口,游离盲肠,避免损伤盲肠系膜血管,于回盲瓣至盲肠末端外约1/3处缝线结扎盲肠,18号针头贯穿2次结扎后的盲肠,挤压少许粪便入腹腔(假手术组则不结扎及穿刺盲肠)还纳腹腔并逐层关闭腹腔,术后均皮下给予30 ml/kg 0.9%NaCl液体复苏。
二、侧脑室定位注射
脓毒症模型制备后立即行侧脑室注射,大鼠头部固定于脑立体定位仪,备皮消毒术区,头顶部正中切口约0.5 cm,暴露前囟、冠状缝,以前囟为中心,依照大鼠脑室定位图谱,右侧矢状缝旁开1.5 mm,前囟点后方向1.1 mm,牙科钻钻一直径约1 mm的圆形骨窗,微量注射器由颅骨表面垂直向下4.5 mm并固定,微量注射泵2 min注射5 μl 0.9%NaCl或浓度0.5 μg/μl的重组HMGB1 5 μl(Chimerigen Laboratories,批号:CHI-RF-311HMGB1)后用骨蜡填补骨窗,逐层缝合。
三、实验动物分组及处理
四、Morris水迷宫实验
水迷宫实验装置为带加热设备的圆柱形水池(直径120 cm,高度50 cm)、圆形平台(直径10 cm,高度26 cm),Supermaze采集分析系统。大鼠实验前先行寻找平台实验筛除缺陷个体,再行造模处理48 h后行连续6 d定位航行实验:随机从4个象限边缘中点面壁放入,设定限时60 s,若60 s内找到平台并停留3 s则软件自动停止记录,此时入水至登上平台时间为逃避潜伏期;若60 s内未找到平台,则引导至平台停留15 s,计逃避潜伏期为60 s;同时软件记录游泳速度、距离、轨迹和各象限活动时间。定位航行后1 d撤去平台进行空间探索实验,记录大鼠60 s内穿越虚拟平台次数及目标象限活动百分比。
五、脑水含量测定
麻醉断头冰上取大脑组织4℃PBS洗净表面血迹并吸除残余水称重(湿重),70℃电热鼓风干燥箱处理24 h后称重(干重),脑水含量=(湿重-干重)/湿重×....。
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